小麦抗白粉病SSH-cDNA文库中差异基因的表达模式

• 作者: 吉万全 吴金华 张宏 王新茹 王秋英 王长有 胡银岗
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 小麦 白粉病 抑制性消减杂交(SSH) 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 2121-2125
• 页数: 5页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3721/SP.j.1006.2008.02121

摘要

为了解白粉菌诱导下抗白粉病小麦的抗病机制,构建了白粉菌接种初期的抑制性消减杂交cDNA(SSH-cDNA)文库.从中随机挑取140个阳性克隆进行测序,去除冗余序列和重复序列后.得到94条EST,利用NCBI的BLAST在线序列比对工具对GenBank的蛋白质数据库进行同源性比对及功能分类.结果表明,49个EST与已知功能蛋白同源性较高,主要涉及初级代谢(2%)、能量代谢(24%)、细胞结构(2%)、转录(2%)、蛋白质合成加工与储藏(16%)、转运(4%)、信号转导(4%)和抗病与防御(30%).经文库比较,筛选出与病程相关蛋白基因同源的EST(Z25-1)和与谷胱甘肽硫转移酶同源的EST(Z440-1),GenBank登录号为EX567369和EX567360.以其EST序列为依据设计引物,通过RT-PCR分析它们在白粉菌诱导下的表达模式,结果该2基因表达存在明显差异.其中,Z25-1在未接种白粉菌时具有一定的表达量,白粉菌侵染后表达量开始上升,侵染72 h时表达量最高,然后下降;Z440-1在未接种时也具有一定的表达量,但在接种初期表达微弱,甚至不表达,24 h后表达开始卜升,到72 h时达最高,然后下降.本研究表明,病程相关蛋白和谷胱甘肽硫转移酶属于诱导型表达基因,且参与白粉病抗病反应,在白粉菌诱导72 h时表达量最高.