小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

• 作者: 吴升华 周国平 管亚飞 袁传顺 郭锡熔 陆超 陈吉庆 陈荣华 黄松明
• 来源期刊: 中华儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 间充质干细胞移植 RNA小分子干扰 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 免疫疾病研究
• 页码范围: 836-841
• 页数: 6页
• 分类号: R72
• 字数: 4951字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1310.2008.11.010

摘要

目的 探讨小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞凋亡的影响.方法 原代培养人骨髓间充质干细胞,谷氨酸诱导凋亡.设计和合成针对Par-4基因mRNA的siRNA(Par-4-siRNA),构建真核细胞表达载体,用脂质体介导转染入骨髓间充质干细胞,利用G418筛选稳定表达细胞株.实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测Par-4 mRNA的表达量.流式细胞术测定细胞凋亡百分率.Western blot测定磷酸化(Thr308)的蛋白激酶Akt1蛋白表达量.比色法测定Caspase-3酶活性.结果筛选出的Par-4-SiRNA-1、2显著抑制人骨髓间充质干细胞中Par-4基因的mRNA表达,mRNA水平分别降低88%、67%.在谷氨酸诱导后24 h,人骨髓间充质干细胞发生凋亡,百分率为60.30%±6.82%.Par-4-SiRNA-1、2都显著抑制谷氨酸的诱导作用,凋亡百分率降为38.80%±3.97%(P＜0.01)和45.49%±4.32%(P＜0.01).谷氨酸诱导后24 h人骨髓问充质干细胞中磷酸化Akt1蛋白表达下调(89.07±6.42和28.30±5.65,P＜0.01),而Par-4-SiRNA-1、2对之下调都有显著抑制作用(63.56±6.75和45.59±4.88,均有P＜0.01).谷氨酸诱导后24 h人骨髓间充质干细胞中Caspase-3酶活性上调(0.1428±0.0495和0.8616±0.1051,P＜0.01),而Par-4-SiRNA-1、2对之上调都有显著抑制作用(0.6581±0.0555和0.7041±0.0401,均有P＜0.01).结论 小RNA干扰可靶向抑制Par-4基因的表达,拮抗谷氨酸诱导的人骨髓间充质干细胞的凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴升华	南京医科大学第一附属医院儿科	83	667	9.0	23.0
2	陈荣华	南京医科大学儿科研究所	241	2081	20.0	32.0
3	黄松明	南京医科大学儿科研究所	115	804	15.0	22.0
4	陈吉庆	南京医科大学第一附属医院儿科	70	331	10.0	13.0
5	郭锡熔	南京医科大学儿科研究所	220	1261	16.0	21.0
6	周国平	南京医科大学第一附属医院儿科	59	173	7.0	9.0
7	陆超	南京医科大学第一附属医院儿科	69	226	7.0	9.0
8	管亚飞	南京医科大学第一附属医院儿科	12	19	3.0	3.0
9	袁传顺	南京医科大学第一附属医院儿科	3	7	2.0	2.0