GFP与水稻条纹病毒病害特异蛋白的融合基因在sf9昆虫细胞中的表达

• 作者: 吴祖建 林奇英 林董 谢联辉 谢荔岩 郑璐平
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻条纹病毒 病害特异性蛋白 绿色荧光蛋白 昆虫细胞sf9
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
• 页码范围: 271-276
• 页数: 6页
• 分类号: S432.41
• 字数: 4027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0412-0914.2008.03.008

摘要

用重叠延伸PCR(overlap Polymerase Chain Reaction,overlap-PCR)方法获得了含有绿色荧光蛋白(Green fluores-cence protein,GFP)和水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)病害特异性蛋白SP(Disease-specific protein)两者的融合基因(GFP-SP),并将其克隆至载体pMD18-T,得到的重组质粒pMD18-T-GFP-SP经Xba Ⅰ/Hind Ⅲ双酶切后与经相同方法处理过的杆状病毒转移载体pFastBacHTb相连接构建成重组转移质粒pFastBacHTb-GFP-P.酶切和测序鉴定证明了其序列的正确性并且无移码现象发生.将此质粒转化人含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DHIOBac,得到含有目的基因片段的重组杆状病毒穿梭质粒rb-GFP-SP.以之转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,st9)细胞,24～48 h后在显微镜200倍可见光视野下观察到被感染细胞发生了细胞和细胞核变大、细胞内颗粒物增多、细胞脱落甚至裂解等一系列与正常的sf9昆虫细胞形态有明显区别的变化.荧光显微镜下可见部分细胞发出清晰的绿色荧光,且大部分荧光集中在细胞质部分.这些结果表明,GFP-SP融合蛋白在sf9昆虫细胞内成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林奇英	福建农林大学植物病毒研究所	152	2641	29.0	42.0
2	谢联辉	福建农林大学植物病毒研究所	184	3024	29.0	43.0
3	吴祖建	福建农林大学植物病毒研究所	166	2128	26.0	36.0
4	谢荔岩	福建农林大学植物病毒研究所	45	610	17.0	23.0
5	郑璐平	福建农林大学植物病毒研究所	11	149	5.0	11.0
6	林董	福建农林大学植物病毒研究所	2	19	2.0	2.0