嗜水气单胞菌J-1株OmpA融合蛋白的高效表达及免疫原性分析

• 作者: 刘永杰 蒋蔚 陆承平
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 嗜水气单胞菌 OmpA融合蛋白 表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 301-306
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4419字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1005-8737.2008.02.014

摘要

以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)J-1株基因组为模板,根据GenBank已发表的嗜水气单胞菌外膜蛋白的基因序列设计1对引物,扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段,定向克隆至表达质粒pET32a(+)中,重组质粒经限制性酶切鉴定后测序.结果表明,插入片段长度为948 bp,与NCBI上登录的几个相关序列相比,同源性在93.1%-95%之间,缺失4个氨基酸.将重组原核表达质粒pET32a-OmpA转化至大肠杆菌BL21(DE3),经诱导可表达分子量约57.4kD的蛋白,凝胶薄层扫描显示OmpA在转化菌中表达量占全菌蛋白的50%以上.用兔抗J-1株总外膜蛋白血清进行Western blot,在57.4kD处有明显反应条带.融合蛋白经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化后免疫新西兰兔制备抗血清,ELISA效价达1:12 800以上.Western blot检测结果显示,该血清与9株具有代表性的气单胞菌的分子量约35 kD的外膜蛋白均有较强反应,说明所表达的融合蛋白不仅保持原有外膜蛋白的免疫原性,而且提示OmpA可能是嗜水气单胞菌的共同保护性抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆承平	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	387	5495	37.0	51.0
2	刘永杰	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	50	409	12.0	18.0
3	蒋蔚	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	2	12	1.0	2.0