Real-time PCR技术用于大菱鲆红体病虹彩病毒的组织敏感性检测及病毒流行情况调查

• 作者: 史成银 吴成龙 孔晓瑜 黄倢
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大菱鲆红体病虹彩病毒 实时定量PCR SYBR GreenⅠ 定量检测 敏感组织
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 752-758
• 页数: 7页
• 分类号: S188|S185
• 字数: 4666字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.05.005

摘要

大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV)可引起大菱鲆病毒性红体病(viral reddish body syn-drome,VRBS)并导致养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)大量死亡.研究利用TRBIV主要衣壳蛋白基因序列设计的1对引物,结合内嵌式核酸染料SYBR Green Ⅰ,建立了TRBIV特异的Real-time PCR检测方法.以10倍梯度稀释的含有TRBIV目的扩增片段的质粒作为标准,进行Real-time PCR反应以确定检测灵敏度.制备标准曲线.结果表明,该对引物具有较高的灵敏度和较强的特异性,能够检测相当于102数量级的TRBIV基因组拷贝,而不与健康大菱鲆组织DNA、淋巴囊肿病毒DNA发生交叉反应.应用建立的Real-time PCR检测方法,对TRBIV的组织敏感性检测和病毒流行情况调查.结果发现,大菱鲆的脾脏、肾脏、脑、鳃、心脏、肝脏、消化道、血液等组织中均可检测到TRBIV的存在,其中脾和肾是TRBIV的最主要的靶器官,每毫克组织的病毒含量分别高达5.23×106和2.18×106个.分子流行病学调查结果显示,山东半岛的多个大菱鲆养殖场中均存在TRBIV的感染和流行,感染鱼每毫克脾组织的病毒含量在1.27×102～2.33×106之间.研究建立了TRBIV Real-time PCR检测方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,TRBIV的快速检测具有应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄倢	中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室	111	1805	25.0	37.0
2	史成银	中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室	28	870	17.0	28.0
3	孔晓瑜	中国海洋大学水产学院教育部海水养殖重点实验室	17	473	13.0	17.0
4	吴成龙	中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室	4	31	3.0	4.0