nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株抑制消减cDNA文库的构建

• 作者: 万海粟 冯志华 叶苏娟 周清华 孙丽亚 朱文 李璐 蔡春季 马力
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺肿瘤 nm23-H1基因 抑制消减杂交 cDNA文库 转移相关基因
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 482-488
• 页数: 7页
• 分类号: R734.2
• 字数: 6935字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2008.04.020

摘要

背景与目的 已有的研究表明,nm23-H1基因是一个重要的肺癌转移抑制基因,为了筛选与该基因表达相关的差异表达基因.本研究拟构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆与nm23-H1转移相关的基因奠定基础.方法利用抑制消减杂交(suppressive subtractive hybridization,SSH)技术构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)间差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库,经蓝白菌落筛选克隆,并PCR反应鉴定.结果 成功构建了该两株细胞株差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库.经蓝白菌落筛选,正向消减文库总共获得约300个白斑克隆,反向消减文库总共获得约400个白斑克隆,从正反向消减文库中各挑选96个克隆进行PCR扩增检测是否有插入片段,结果显示在挑选的正向文库中有84个克隆有插入片段,反向文库中有83个克隆有插入片段.其片段大小范围为(300-750)bp.结论 抑制消减杂交是克隆差异表达基因的有效方法,我们应用SSH法和T/A克隆技术成功建立了nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库.nm23-H1基因在肺癌细胞中的表达可能影响某些转移相关基因的差异表达.