肺腺癌耐药相关基因BC006151原核表达载体的构建及蛋白表达

• 作者: 周向东 李学军 杨和平
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺肿瘤 基因载体 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 359-362
• 页数: 4页
• 分类号: R734.2
• 字数: 2852字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2008.03.033

摘要

背景与目的 肺癌细胞对化疗药物的耐受是肺癌患者生存率低的重要原因之一.我们在前期研究中发现了一条肺腺癌耐药相关的基因BC006151,本研究拟构建肺腺癌耐药相关基因的原核表达载体PGEX-4T-1-BC006151,诱导其表达及鉴定目的蛋白,从而揭示该基因与肺腺癌耐药的关系.方法 以RNA为模板RT-PCR扩增,产物与质粒PGEX-4T-1用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,用T4DNA连接酶将二者连接,连接物转化DH5α菌,重组克隆菌经测序鉴定确认.将带有目的片段的重组克隆载体转化BL21表达菌,SDS-PAGE电泳检测表达产物,Western blot检测GST融合蛋白表达.结果 经酶切鉴定及DNA测序,重组质粒中已插入了目的基因片段,与GenBank中公布的BC006151基因序列一致.重组克隆载体经BL21表达菌表达,获得40 KD的条带(其中目的蛋白13 KD,GST标签26KD).结论 成功构建了肺腺癌耐药相关基因BC006151原核表达载体,并成功诱导了目的蛋白表达,GST亲和纯化,为进一步制备该基因的多克隆、单克隆抗体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨和平	第三军医大学西南医院呼吸科	135	1059	16.0	26.0
2	周向东	第三军医大学西南医院呼吸科	89	723	15.0	22.0
3	李学军	第三军医大学西南医院老年病科	43	451	10.0	20.0