肌球蛋白轻链激酶非激酶活性调节磷酸化肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动

• 作者: 吕广艳 崔颖 梁明丽 高颖
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: 平滑肌收缩 肌球蛋白 肌球蛋白轻链激酶(MLCK) 肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性 体外肌丝运动
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 91-96
• 页数: 6页
• 分类号: Q71|R331.3
• 字数: 4305字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2008.01.014

摘要

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为进一步阐明MLCK非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用,利用已删除部分激酶区域的MLCK重组体(pGEXF6.5)在大肠杆菌中进行表达,采用亲和层析技术纯化表达的MLCK片段,应用EnzChek磷分析试剂盒检测MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、水解重酶解肌球蛋白(heavymeromyosin,HMM)及肌球蛋白亚片段1(subfragmentl,S1)ATP酶活性的影响,体外检测MLCK片段对肌动蛋白肌丝运动的调节.研究结果显示,pGEX-F6.5重组表达载体在大肠杆菌中以可溶性GST融合蛋白的形式表达.该融合蛋白经Glutathione-Sepharose4B纯化、SDS-PAGE鉴定得到较纯的单一表达条带.纯化的MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、HMM和S1的ATP酶活性均有明显激活作用.MLCK片段激活磷酸化肌球蛋白ATP酶活性为:Vmax=(19.426±1.669)倍;Km=(0.486±0.106)μmol/L,MLCK片段对磷酸化HMM和S1的ATP酶活性也有相似的刺激作用.体外肌丝运动研究表明,随着MLCK片段浓度的增加,磷酸化肌球蛋白与肌动蛋白结合的数量不断增加,肌丝运动的速度也随之增加.上述结果表明,MLCK的C端非激酶活性具有调节磷酸化的肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕广艳	大连医科大学辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室	30	220	7.0	14.0
2	高颖	大连医科大学生物化学与分子生物学教研室	23	82	5.0	8.0
6	崔颖	大连医科大学辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室	13	61	5.0	7.0
7	梁明丽	大连医科大学生物化学与分子生物学教研室	2	31	2.0	2.0