高压氧对外源性人神经干细胞移植治疗损伤脑组织神经元病理状态的改善效应

• 作者: 栾佐 汪兆艳 白洁
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞移植 高压氧 缺氧缺血性脑损伤 尼氏染色
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1401-1405
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6546字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.08.012

摘要

目的:研究证明高压氧治疗能明显减轻缺氧后宿主脑区深部水肿,减少内源性神经元变性与坏死,并增加围产期鼠新生神经元数量与碱性成纤维生长因子活性.实验拟进一步观察缺氧缺血性脑损伤大鼠移植人神经干细胞后予高压氧治疗对脑组织神经元病理改变的影响.方法:实验于2007-04在解放军海军总医院完成.①细胞来源及动物:经医院伦理委员会授权,孕妇知情同意下留取孕12周流产的人胎儿脑组织.新生7 d龄SD大鼠20只,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:取胎儿脑组织,在无菌条件下培养扩增并制备成人神经干细胞单细胞悬液.20只大鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型,3只死亡,剩余鼠随机数字表法分为2组,细胞移植+高压氧组9只,单纯细胞移植组8只.造模后3 d,两组大鼠均于左侧侧脑室进行细胞移植,注射位点以前囟为参照点,AP= -1 mm,ML= -1.5 mm,DV= -4.0 mm,缓慢注入2×106 L-1细胞悬液5 μL.移植后1 h,将细胞移植+高压氧组大鼠放入高压氧舱内,给予高压氧通气,升压及降压过程各15 min,最终达压力为1.8个绝对大气压,稳压60 min,1次/d,连续10 d.两组大鼠麻醉后断头取脑,制备组织切片.③实验评估:免疫荧光法检测神经干细胞巢蛋白的表达、人神经干细胞植入后神经丝蛋白表达及其向神经元分化情况.尼氏染色检测移植后脑组织皮质、海马神经元形态、结构的变化.结果:移植过程中细胞移植+高压氧组有1只鼠因麻醉死亡,高压氧通气过程中没有动物死亡.①人神经干细胞的鉴定:人胎儿脑组织体外培养12 d获取生长旺盛的人神经干细胞小集落,即神经球.倒置显微镜下观察可见每个小集落为数十个细胞构成,细胞折光性强,周边有清晰的光晕.免疫荧光标记大部分活细胞表达巢蛋白.②人神经干细胞植入后神经丝蛋白表达及其向神经元分化:植入后10 d,两组在皮质及海马区均可见神经丝蛋白阳性细胞,即植入细胞分化形成的神经元,其细胞形态与宿主内源性细胞相似.③神经元尼氏染色:两组大鼠均没有发现肿瘤形成.移植后10 d与单纯细胞移植组相比,细胞移植+高压氧组海马及皮质区组织细胞水肿程度明显减轻,且海马CA1区、CA3区、齿状回神经元排列更整齐,组织结构更完整.结论:缺氧缺血性脑损伤新生大鼠移植人神经干细胞后,高压氧治疗可减轻损伤易感区组织细胞水肿程度,并使海马区神经元结构更加完整,推测有可能促进细胞的成活、迁移及分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	白洁	北京大学第一医院儿科	18	689	9.0	18.0
2	栾佐	解放军海军总医院儿科	16	89	5.0	9.0
3	汪兆艳	解放军海军总医院儿科	6	26	2.0	5.0