脱氧尿嘧啶及尿嘧啶DNA糖基化酶抗PCR产物污染能力研究

• 作者: 郑子君
• 来源期刊: 职业卫生与病伤
• 关键词: 尿嘧啶DNA糖基化酶(UDC) 脱氧尿嘧啶(OUTP) 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 67-70
• 页数: 4页
• 分类号: R446.62
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-172X.2008.02.002

摘要

目的 探讨脱氧尿嘧啶及尿嘧啶DNA糖基化酶抗PCR产物污染的能力.方法 用Taq-Man荧光定量PCR检测方法进行定量检测.将一系列不同浓度的含dUTP的HBVvDNA PCR扩增产物作为污染源,分别加至含dUTP/UDC的PCR反应体系和普通荧光定量PCR反应体系中,在荧光定量PCR仪上进行定量检测,从而得出含dUTP/UDC的PCR反应体系的抗污染能力.结果 最佳抗污染实验条件:UDG酶含量0.05 U,消化时间37℃5 min,灭活时间92℃ 1 min;dUTP100%代替dTIP.含0.05 U的UDG抗污染反应体系对每管浓度为103拷贝/ml的污染物可完全消化,并随UDC含量的增高及消化时间的延长,抗污染能力增强.结论 dUTP/UDG反应体系的应用能有效防止PCR产物污染,但抗污染能力是有一定限度的,尚需加强实验室标准化管理,才能真正达到抗污染效果.