基因捕获成体干细胞及鉴定的初步研究

• 作者: 王明科 罗成基 邹仲敏
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因捕获 成体干细胞 聚合酶链反应 β-半乳糖苷酶
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 112-115,封3
• 页数: 5页
• 分类号: Q789
• 字数: 3325字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-6611.2008.02.005

摘要

目的 探讨基因捕获技术应用于成体干细胞的可行性. 方法 线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY,利用Lipofectamine2000转染包装细胞PA317,LacZ染色证明转染效率后,收集病毒上清,感染种植于24孔板的小鼠成肌干细胞系C2C12、人骨髓间充质干细胞(hBMSC).为排除潮霉素B筛选的假阳性干细胞,以C2C12、hBMSC细胞基因组DNA为模板,PCR 扩增ROSAFARY上LacZ部分序列(560 bp)进行鉴定. 结果 ROSAFARY脂质体转染PA317细胞后LacZ染色, 400倍镜下可见2-5个蓝色细胞/视野.病毒上清感染种植于24孔板的C2C12和hBMSC, 4 d后经LacZ染色,C2C12可见6个蓝色细胞/孔,400倍镜下hBMSC可见4-5个蓝色细胞/视野.最佳PCR鉴定参数为基因组模板量2 μg, 退火温度55.5 ℃,Mg2+浓度3 mmol/L. 结论 逆转录病毒基因捕获载体感染多种成体干细胞后 LacZ染色显示可成功捕获激活状态启动子驱动的基因,为基因捕获应用于成体干细胞分化及恶性转化分子机制的研究奠定了基础.