接种PRSV番木瓜种苗胞质酵母双杂交cDNA文库的构建与分析

• 作者: 周鹏 沈文涛
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 番木瓜 PRSV cDNA文库 酵母双杂交系统
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术应用及组织培养
• 页码范围: 419-423
• 页数: 5页
• 分类号: Q936|Q78|Q43
• 字数: 3656字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2008.04.004

摘要

利用Trizol法提取接种PRsv 4 d的番木瓜种苗总RNA,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,双链cDNA末端经Pfu-DNA聚合酶补平,与EcoR I接头连接,XhoI酶切消化产生粘端.用Sepharose CL-2B柱分离纯化去除小分子cDNA片段,再与pMyr酵母表达载体连接,转化受体菌XL10-Gold,构建了接种PRSV番木瓜种苗胞质酵母双杂交cDNA文库.所获得的原始文库的克隆总数为1.8×106cfu,重组率为100%,文库滴度为2.6×109cfu/mL.对随机选取的34个克隆进行PCR鉴定,结果表明插入片段长度均大于O.5 kb且集中在1 kb左右.文库质量鉴定结果表明,该文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周鹏	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	129	1451	21.0	32.0
2	沈文涛	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	66	524	11.0	20.0