实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化

• 作者: 张丽霞 张寄南 束永前 潘世扬 穆原 谢而付 赵文君 陈丹 陈进步 高丽 黄珮珺
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: RASSF1A 甲基化 实时荧光定量 甲基化特异性聚合酶链反应 肺癌 血浆DNA
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 194-196
• 页数: 3页
• 分类号: Q503
• 字数: 2554字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法.方法 以肺癌细胞株NCI-H460作为RAssF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200 μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆.用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测.以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量.结果 实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆).15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%).5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml.结论 实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强.