青稞HvBADH1基因的克隆及其转化烟草的初步研究

• 作者: 步怀宇 王英娟 贾敬芬 赵宇玮 郝建国
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 青稞 HvBADH1 基因克隆 遗传转化 耐盐性 RT-PCR RACE
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1153-1159
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

应用RT-PCR结合RACE技术,从青稞总RNA中扩增得长度为1 512 bp的甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因cDNA全长编码序列.通过氨基酸同源性比对,发现该序列的推定表达产物与大麦BADH同工酶BBD2的同源性为98.4%,而与小麦、玉米和水稻等禾本科作物的BADH同源性分别为97.0%、84.7%和85.1%.将克隆到的青稞cDNA序列命名为HvBADH1,投递到GenBank,获得收录号EF492983.HvBADH1可以在原核表达系统TB1-pMAL c2x中正常表达出分子量为54.2 kD的多肽链.将HvBADH1的编码ORF,插入到添加了植物表达CaMV 35S启动子和NospolyA终止子调控元件的植物表达载体pCAMBIA1301质粒相应的克隆位点中,构建了HvBADH1基因的农杆菌植物转化系统LBA4404(pCAM-ba).进而采用农杆菌介导法,将HvBADH1基因导入烟草中,对所获得的潮霉素抗性烟草株系进行PCR、Southern blot和RT-PCR等分子生物学榆测,结果表明,在得到的2个转基因株系中,HvBADH1基因已整合到受体植物基因组中,并且可以在mRNA水平上进行转录.