RNA干扰法对内皮细胞基质金属蛋白酶-2功能研究

• 作者: 胡晓慧 范磊 阮长耿
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基质金属蛋白酶-2 RNA干扰 内皮细胞
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 内皮细胞生物学
• 页码范围: 381-386
• 页数: 6页
• 分类号: R329.28
• 字数: 4393字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2137.2008.02.031

摘要

本研究运用RNA干扰(RNAi)技术将内皮细胞MMP-2进行基因沉默,揭示MMP-2在内皮细胞增殖、迁移、侵袭、血管形成以及细胞周期等方面的作用.采用脂质体法将MMP-2小干扰RNA(siRNA)转化内皮细胞EAhy926,通过RT-PCR及流式细胞术分别在基因和蛋白水平验证转化的效率.应用MTT比色法测定经MMP-2 siRNA干扰不同时间EAhy926细胞的增殖能力;虎红染色测定光密度法观察干扰48小时后内皮细胞在两种趋化因子作用下的迁移及侵袭能力的变化;Matrigel胶三维培养法观察干扰48小时后内皮细胞血管形成能力的改变;流式细胞术及半定量RT-PCR法测定内皮细胞周期和相关基因的变化.结果表明:干扰因素施加后48小时MMP-2基因表达水平降低至谷底,较正常对照下降约82%;流式细胞术分析表明,干扰因素施加后60小时MMP-2蛋白表达水平降低至谷底,较对照下降约60%.MTT法检测显示干扰前后内皮细胞增殖无明显变化.内皮细胞经MMP-2 siRNA干扰48小时后在两种趋化因子作用下的迁移能力均受到抑制,且时COL Ⅳ的抑制作用强于Fn(Fn 未干扰组0.581±0.012,干扰组0.261±0.002;COL Ⅳ未干扰组对干扰组为0.467±0.009 vs 0.110±0.010,p<0.01).侵袭实验也有相似的结果(Fn未干扰组对干扰组为0.365 4±0.012 vs 0.101±0.002;COL Ⅳ未干扰组对干扰组为0.317±0.009 vs 0.102±0.010,p<0.01).内皮细胞体外的血管形成能力在经siRNA干扰48小时后下降至正常的58.9%.内皮细胞经MMP-2 siRNA干扰48小时及72小时后,有丝分裂后期细胞比例(G1)分别由对照组[(65.9±2.53)%;(63.2±1.89)%]上升至[(83.9 4±2.53)%,(89.2 4±1.24)%](p<0.01);DNA复制期(S)和有丝分裂前期(G2)期细胞比例分别由对照组[(32.7±1.91)%,(37.1±2.65)%]下降至[(18.1±1.49)%,(10.2±0.85)%](p<0.01).半定量RT-PCR分析结果显示,内皮细胞Rb、cyclin D1以及PCNA基因表达量分别下降至未干扰者的35%,51%和22%.结论:MMP-2的表达与内皮细胞的增殖无明显相关性,但在内皮细胞迁移、侵袭和血管形成等方面发挥重要作用,同时还通过Rb、cyclinD1以及PCNA等基因参与内皮细胞周期的调控.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范磊	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	8	45	3.0	6.0
2	阮长耿	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	188	746	13.0	17.0
3	胡晓慧	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	20	68	5.0	8.0