体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式

• 作者: 张键荣 桂耀庭 秦洁 蔡志明 郭新
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎于细胞 拟胚体 发育 分化 免疫组织化学 小鼠
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 547-551
• 页数: 5页
• 分类号: R321.1
• 字数: 4695字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-1356.2008.04.019

摘要

目的 探讨小鼠胚胎干细胞来源的拟胚体(EBs)形成以及分化发育90d过程中的形态学特征及基因表达模式.方法 将小鼠胚胎干细胞通过悬浮培养获得EBs,EBs在不添加其他诱导因子的体系中连续悬浮培养,采用形态学观察、免疫组织化学染色和RT-PCR检测EBs培养过程中的细胞发育分化特征和基因表达模式.结果 将胚胎干细胞转移到去除白血病抑制因子(LIF)的悬浮培养液中培养24h左右即可形成EBs;培养3d左右,部分EBs出现简单胚体结构;在EBs分化7d左右,逐步向空腔化胚体发育;培养9d左右,EBs可发育为原始的囊性胚体结构;培养11d左右,EBs形成典型的、结构完整的三胚层结构.HE染色结果显示,发育早期的EBs包含大量尚未完全分化的ES细胞,随着培养时间的延长,EBs向空腔化、囊性胚体发育,逐渐形成类似于早期组织的形态.悬浮培养7周左右,EBs的发育分化基本停止.免疫组织化学染色结果表明,中胚层心肌细胞特异性标志蛋白cTnT,外胚层特异性标志蛋白Nestin在15d的EB8中表达呈阳性.RT-PCR检测也显示形成的EBs表达外胚层特征性基因Vimentin、Nestin,中胚层特征性基因Flk-1、Gata-1和内胚层特征性基因Transthyretin、α-fetoptotein.结论 小鼠胚胎干细胞来源的EBs具有分化为3个胚层的能力,EBs形成的三维结构能够有效的启动细胞的分化;EBs来源的三胚层细胞的发育分化时序和特征,将为鉴定胚胎干细胞来源的分化细胞提供重要参照.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭新	北京大学深圳医院男性生殖医学与遗传深圳市重点实验室深圳北京大学香港科技大学医学中心	16	56	5.0	7.0
2	秦洁	北京大学深圳医院男性生殖医学与遗传深圳市重点实验室深圳北京大学香港科技大学医学中心	11	29	4.0	5.0
3	桂耀庭	北京大学深圳医院男性生殖医学与遗传深圳市重点实验室深圳北京大学香港科技大学医学中心	78	236	9.0	11.0
4	张键荣	北京大学深圳医院男性生殖医学与遗传深圳市重点实验室深圳北京大学香港科技大学医学中心	6	15	3.0	3.0