犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达

• 作者: 宋慧娟 巴彩凤 张轶博 武洁 王光川 苏荣健 赵微
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 犬 黑皮质素受体4 真核表达载体 MDCK细胞
• 年，卷（期）: 2008,（31）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 13564-13567
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 4525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2008.31.035

摘要

[目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达.[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A.重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达.[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%.RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达.[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	巴彩凤	辽宁医学院实验动物中心	91	369	10.0	14.0
2	苏荣健	辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室	34	159	8.0	11.0
3	赵微	辽宁医学院实验动物中心	24	123	6.0	10.0
4	武洁	辽宁医学院附属第一医院病理科	8	10	2.0	2.0
5	王光川	辽宁医学院实验动物中心	11	30	3.0	5.0
6	宋慧娟	辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室	19	40	3.0	4.0
7	张轶博	辽宁医学院免疫与病原生物学教研室	18	62	4.0	6.0