嗜酸氧化亚铁硫杆菌启动子探针载体的构建

• 作者: 刁梦雪 杨宇 邱冠周 黄芝英
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 嗜酸氧化亚铁硫杆菌 启动子探针载体 β-半乳糖苷酶 定点突变
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-9
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2213字
• 语种: 中文

摘要

目的:为了研究嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)启动子结构与功能.方法:以pSV-β-galactosidase质粒为骨架,通过定点突变的方法引入一个新的Bst B Ⅰ单酶切位点,构建能在大肠杆菌(Escherichia coli)中正常复制的启动子探针载体.利用PER的方法将A.grttoocifsnd菌cycA2基因上游5'段上游DNA片段克隆到探针载体β-半乳糖苷酶基因上游以替代其原有启动子(gpt启动子),并将重组的质粒转化E.coli DH5α菌株.通过检测宿主细胞的β-半乳糖苷酶活性,来鉴定启动子片段,并分析了启动子探针质粒载体的功能及启动子的强度.结果:pSV-β-galactosidase质粒被正确突变,成功构建了启动子探针载体pSVB.来源于A.ferrooxidans菌的启动子片段可驱动β-半乳糖苷酶基因在E.coli细胞中表达,转化子酶活性约为gpt启动子驱动下活性的70%.结论:启动子探针载体(pSVB)可用于A.ferrooxidans菌或者其它原核生物启动子的分离及进一步的分析研究.酶活性分析结果表明,来源于A.ferrooxidans菌cycA2基因上游5'段上游DNA片段具有显著启动子活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱冠周	中南大学资源加工与生物工程学院	335	5466	36.0	53.0
2	杨宇	中南大学资源加工与生物工程学院	153	1018	15.0	22.0
3	黄芝英	中南大学资源加工与生物工程学院	2	4	2.0	2.0
4	刁梦雪	中南大学资源加工与生物工程学院	2	15	2.0	2.0