小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立

• 作者: 刘斌 张伟杰 曹荣华 朱珉 王璐 祁洪刚 胡枫 陈刚 陈实 陈栋
• 来源期刊: 中华器官移植杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 半乳糖苷酶类 内皮细胞
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 69-72
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3570字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-1785.2008.02.001

摘要

目的 探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA(SiRNA)转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰(RNAi)转染体系.方法 针对猪α1,3-半乳糖苷转移酶(α1,3-GT)基因合成数对SiRNA分子,运用不同转染体系(DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000)转染永生化猪血管内皮细胞系(PED).分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1,3-GT作用下PED的α1,3-半乳糖残基(α-Gal)表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响.结果 PED能有效发生特异性RNA干扰现象,且呈明显的剂量依赖性特征.SiRNA-1与脂质体RiboJuice在12 nmol/L∶6 μl时,干扰效果最佳(67.3%～89.5%),整体量效优于DOSPA及Lipofectamine 2000转染体系.靶细胞转染SiRNA-1后48 h时的α-Gal相对表达水平为10.5%,而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象.脂质体转染体系在转染后6～12 h对靶细胞生长稍有影响,24 h后细胞活性逐渐恢复.结论 猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制,RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式,为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础.