双重实时荧光逆转录聚合酶链反应检测尿液DD3/PSA mRNA比值及其应用

• 作者: 吴秀玲 李澄棣 沈默 胡元平 陈伟 陈俐丽 陈凤萍 陈占国 陈晓东 陶志华
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺肿瘤 基因 聚合酶链反应 尿液
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 261-264
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 4000字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0376-2491.2008.04.012

摘要

目的 建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测尿液DD3/PSA mRNA比值,评价其初步应用.方法 分别在前列腺特异性抗原(PSA)基因外显子1和2、差异显示编码3(DD3)基因外显子1和3之间设计一对引物和一条探针,PSA和DD3基因的TaqMan-MGB探针5'分别标记HEX和FAM荧光素,建立双重实时荧光RT-PCR检测尿液DD3/PSA mRNA比值的方法,并对方法学进行评价.对34例前列腺癌(Pca)、44例良性前列腺增生(BPH)患者前列腺按摩后尿液中的DD3/PSA mRNA比值进行检测,评价其临床应用价值.结果 扩增产物经测序证明为PSA和DD3特异性片段.以LNCaP细胞cDNA作模板,PSA mRNA和DD3 mRNA最低检测限分别为0.6细胞/反应和60细胞/反应.DD3/PSA mRNA比值批内、批间变异系数分别为3.8%～4.7%和4.1%～4.9%.Pca组尿液DD3/PSA mRNA比值明显高于BPH组(P＜0.01).尿液DD3/PSA mRNA比值诊断Pca的ROC曲线下面积(AUC)为0.746(95%CI:0.630～0.862),当截断值为0.254时其敏感度和特异度分别为64.7%和77.3%,其阳性率与临床和病理分级均无关.结论 成功建立了双重实时荧光RT-PCR检测尿液DD3/PSA mRNA比值的分子生物学诊断方法.该方法对Pca诊断具有较高特异度和敏感度,且节省操作时间、降低实验成本,有望成为Pca早期诊断的有效方法.