一种改进的荧光定量PCR标准曲线法的建立

• 作者: 付艳艳 吴丁兰 常弘 彭瑾瑜 朱彦博 钟惟德
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 核酸扩增技术 荧光光度测定法 荧光染料 RNA,信使
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 新技术与新方法
• 页码范围: 687-689
• 页数: 3页
• 分类号: R4
• 字数: 2745字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1009-9158.2008.06.020

摘要

目的 对常规实时荧光定量PCR(RT-PCR)的标准曲线法进行改进,以建立一种更为准确的RT-PCR的标准曲线定量法.方法 通过构建β-actin、KLK11的质粒DNA标准品,以β-actin质粒DNA为正常对照,制作内参基因和目的 基因的标准曲线,获得各自的扩增曲线.RT-PCR检测两种基因在恶性前列腺组织细胞LNCAP中的表达,并将改进的标准曲线法与常规的标准曲线法分别对β-actin/KLK11实时定量PCR的结果进行分析,分析两种方法的差异,以衡量新方法的准确性.结果 所得β-actin和KLK11的标准曲线线性相关性良好(β-actin R2=0.991,KLK11R2=0.992),但两种基因的扩增效率有差异(β-actin 123%,KLK11 99%).两种不同的标准曲线法处理后得到不同的结果:常用标准曲线法结果显示KLK11在LNCAP中有表达下调,而改进的标准曲线法得出KLK11在LNCAP中上调4.46倍.目的 基因与内参基因的扩增效率差异有统计学意义(t=4.829,P＜0.05).结论 与常规的绝对定量法比较,改进的标准曲线法避免了因默认目的 基因与内参基因有相同的扩增效率而导致的错误,是一种更为准确的荧光定量PCR分析方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟惟德	广州市第一人民医院泌尿外科	102	589	12.0	18.0
2	朱彦博	中山大学生命科学学院	5	12	2.0	3.0
3	常弘	中山大学生命科学学院	49	582	14.0	21.0
4	吴丁兰	中山大学生命科学学院	5	15	3.0	3.0
5	付艳艳	中山大学生命科学学院	6	73	4.0	6.0
6	彭瑾瑜	中山大学生命科学学院	6	73	4.0	6.0