嵌合KGDS基序的蜱抗凝血肽突变体基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达

• 作者: 叶彬 武卫华 陈炳龙
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 蜱抗凝血肽(TAP) 赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸基序(KGDS) 原核表达 大肠埃希菌
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 358-361
• 页数: 4页
• 分类号: R378.21
• 字数: 3650字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5234.2008.05.011

摘要

目的 设计含赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸基序(KGDS)的蜱抗凝血肽(TAP)突变体基因序列,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中与硫氧还蛋白(Trx)融合表达,以获得Trx-TAP-KGDS融合蛋白.方法 人工合成目的 基因,定向克隆于含Trx基因的高效原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a(+)-TAP-KGDS,并转化BL21感受态菌,以PCR及双酶切鉴定阳性克隆;含正确重组质粒的工程菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物. 结果 重组质粒经PCR及双酶切鉴定,均获得约209 bp的基因片段,与预期大小一致;SDS-PAGE分析显示,含重组质粒的工程菌在IPTG的诱导下高效表达分子质量单位约为24 ku的蛋白质,该蛋白以水溶性形式为主. 结论 构建了含KGDS基序的TAP突变基因的原核表达载体pET32a(+)-TAP-KGDS,并成功进行了融合表达,为进一步研究其抗凝血活性打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶彬	重庆医科大学病原生物学教研室	62	362	10.0	16.0
2	武卫华	重庆医科大学病原生物学教研室	24	92	5.0	8.0
3	陈炳龙	重庆医科大学病原生物学教研室	1	2	1.0	1.0