亚硫酸氢盐测序法DNA甲基化标记筛查技术的改进研究

• 作者: 李凡 艾红伟 薛小琦 赵贵森 郑海燕 黄代新
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 亚硫酸氢盐测序法 DNA甲基化 亚硫酸氢盐类 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 1043-1046
• 页数: 4页
• 分类号: R9
• 字数: 4046字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1009-9158.2008.09.020

摘要

目的 改进DNA亚硫酸氢盐测序法(bisulfite genomic sequencing,BGS),建立一种简便快速的甲基化标记筛查技术.方法 基因组DNA在亚硫酸氢盐处理、脱盐纯化后直接进入碱性的PCR体系,通过延长预变性时间完成修饰过程,然后进行常规亚硫酸氢盐PCR(bisulfite-PCR,BSP)扩增;首轮扩增产物再用5'端加有高GC标签序列的引物进行2次扩增,达到调整GC含量和直接测序的目的 .同时用传统和改进BGS法检测3T3-L1细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因和Hela细胞雄激素受体基因启动子的甲基化情况,以评估改进方案的可行性.并用Alu序列实时定量BSP技术比较传统和改进BGS法的灵敏度.结果 无论是高甲基化还是低甲基化片段,改进的BGS法均可实现BSP产物的直接测序,结果与传统法一致.改进法修饰的DNA转化率达到100%,特异度＞93.75%,灵敏度显著高于传统方法(t=2.978 2,P＜0.05),并有良好的重复性.结论 改进后的BGS方法简单灵敏,可用于甲基化标记的快速筛查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李凡	河南科技大学法医学院	80	207	7.0	11.0
2	黄代新	华中科技大学同济医学院	64	409	9.0	17.0
3	薛小琦	河南科技大学法医学院	15	36	4.0	5.0
4	郑海燕	河南科技大学法医学院医学院	9	24	3.0	4.0
5	赵贵森	河南科技大学法医学院	16	35	3.0	5.0
6	艾红伟	河南科技大学法医学院	4	10	2.0	3.0