人神经干细胞移植到缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的存活及分布

• 作者: 尹国才 屈素清 栾佐 王桂芬 白洁 高宝勤
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 移植 缺氧缺血 新生鼠
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2201-2205
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6550字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.12.006

摘要

目的:新生儿缺氧缺血性脑病是导致脑性瘫痪的重要原因,至今缺乏有效疗法.将体外培养的人神经干细胞经脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生鼠,观察植入细胞在宿主脑内的存活、迁移及分化.方法:实验于2005-01/09在解放军海军总医院儿科实验室完成.①对象:神经干细胞来源于孕12周流产的人胎儿脑组织,孕妇签署知情同意书,符合医院伦理委员会规定.清洁级SD新生鼠80只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组,40只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:取人胚胎脑组织,机械分散法分离单个核细胞,接种于添加表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中,获取生长旺盛的人神经干细胞球,制成单细胞悬液,浓度约为5.0×1011L-1,培养6 d后行PKH标记用于植入后示踪.两组新生鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型,造模后3 d,细胞移植组损伤侧脑室缓慢注入5 μL人神经干细胞悬液,模型对照组于相同部位注入等量生理盐水.③实验评估:取未经PKH标记的细胞球, 通过免疫细胞化学染色鉴定巢蛋白的表达及其向神经元、星形胶质细胞的分化情况.分别于细胞移植后1,2,4周及3个月,常规取脑组织,行免疫组织化学和荧光分析,观察植入后细胞存活及分布情况.结果:在造模及细胞移植过程中,因麻醉、出血细胞移植组新生鼠死亡5只,模型对照组死亡7只,存活率85%～90%.①神经干细胞的鉴定及分化:80%活细胞巢蛋白呈阳性表达,并可分化为神经元、星形胶质细胞.②神经干细胞植入后存活及分布情况:植入后1周,神经丝蛋白阳性细胞多位于损伤侧皮质及海马处,纹状体、脑干、小脑、嗅球也有少量分布.植入后2周,海马和皮质可见神经丝蛋白阳性细胞,胞体伸出的神经微丝更长,细胞数量与1周时基本相似.植入后4周及3个月时PKH阳性细胞数量明显减少.结论:在含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中形成的人神经干细胞球,具有良好的增殖能力,可分化为神经元,移植至缺血缺氧新生鼠脑中能够向损伤区迁移,分布范围广.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	栾佐	解放军海军总医院儿科	16	89	5.0	9.0
2	高宝勤	首都医科大学附属天坛医院儿科	60	270	9.0	12.0
3	屈素清	解放军海军总医院儿科	6	38	3.0	6.0
4	王桂芬	首都医科大学附属天坛医院儿科	7	30	3.0	5.0
5	尹国才	解放军海军总医院儿科	1	6	1.0	1.0
6	白洁	北京医科大学附属第一医院儿科	1	6	1.0	1.0