猪IFN-γ基因的融合表达及其表达产物的生物学特性

• 作者: 才学鹏 景志忠 李健 潘晓梅 窦永喜 翟军军
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 IFN-γ基因 融合表达 蛋白纯化 生物学活性
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 525-530
• 页数: 6页
• 分类号: S852.42|Q786
• 字数: 5809字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.06.015

摘要

依照猪IFN-γ(pIFN-γ)成熟蛋白基因序列设计引物,将已扩增的pIFN-γ基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了GST-pIFN-γ融合表达载体,该载体转化宿主菌BL21后用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行了筛选和优化,筛选出最佳诱导表达条件后大量诱导表达,可溶性的表达产物经GST琼脂糖凝胶亲和纯化;包涵体经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化.经SDS-PAGE和Western-blot分析,证实得到了高纯度的融合蛋白,该蛋白的分子质量为42ku.选择FMDV和PRV两种不同的病毒(RNA病毒和DNA病毒)进行GST-pIFN-γ抗病毒活性测定.结果表明,GST-pIFN-γ融合蛋白可有效抑制这两种病毒引起的细胞病变,其对FMDV的抑制作用远远大于对PRV的抑制.对GST-pIFN-γ融合蛋白的稳定性及机体毒副作用的研究表明,该pIFN-γ的稳定性有较大提高,而毒副作用大大降低.