LR重组法构建重组腺病毒rAd5-Vpr

• 作者: 冯学泉 徐军 徐新女 王淑杰 王金环
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 腺病毒科 质粒 聚合酶链反应 HIV
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 840-842
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2008.11.003

摘要

目的:构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒.方法:采用限制性内切酶消化和T4 DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vpr和腺病毒骨架质粒pAdeno体外LR位点特异性重组的方法,将Vpr基因转移至腺病毒骨架质粒pAdeno上,最后重组骨架质粒pAdeno-Vpr鉴定正确后经Pacl酶切,转染HEK 293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-Vpr.同时在HEK 293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测病毒滴度.结果:PCR鉴定重组腺病毒rAd5-Vpr构建成功;扩增后检测病毒滴度约为5×108PFU/mL.结论:应用LR重组法能成功构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒,扩增后滴度能满足实验需要,为进一步相关研究的开展奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯学泉	天津医科大学一中心临床学院神经外科	6	44	4.0	6.0
2	王金环	天津医科大学一中心临床学院神经外科	7	19	3.0	4.0
3	徐新女		8	40	5.0	6.0
4	王淑杰		4	30	4.0	4.0
5	徐军	南开大学医学院	1	6	1.0	1.0