具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒人源单链抗体的制备

• 作者: 丛登立 吕绍武 徐俊杰 李唯 段玉晶 王诗雯 石毅 罗贵民 苏家明 闫岗林 闫飞 霍锐 魏景艳
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人源单链抗体 噬菌体展示抗体库 谷胱甘肽过氧化物酶 硒 化学突变
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1379-1383
• 页数: 5页
• 分类号: Q511
• 字数: 3700字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0251-0790.2008.07.019

摘要

以谷胱甘肽(GSH)为靶抗原,从噬菌体展示人源单链抗体库中筛选人源单链抗体(scFv).经3轮筛选后,用ELISA方法检测出5个(2,11,16,24,32 )可以和GSH结合的克隆.PCR产物的电泳和测序结果表明,只有3个克隆(11,16,24)具有完整的scFv编码基因.选取和GSH结合力高的克隆11的scFv 编码基因组装到表达载体pPELB上,在大肠杆菌Rosetta中进行可溶性表达,用Ni 2+ 螯合亲和层析纯化scFv-11,免疫点印迹结果证实该抗体能与GSH特异结合.通过化学突变将scFv-11的丝氨酸转变成硒代半胱氨酸(Sec)后,获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力的含硒(Se)人源单链抗体(Se-scFv-11),其活力为351U/μmol.