玉米双低频酶cDNA-AFLP体系的建立

• 作者: 宋欣 杨文鹏 赵德刚
• 来源期刊: 玉米科学
• 学科: 农学
• 关键词: 玉米 RNA提取 cDNA-AFLP
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·品种资源
• 页码范围: 12-15,21
• 页数: 5页
• 分类号: S513.035.3
• 字数: 3652字
• 语种: 中文

摘要

以玉米自交系QCL1094为材料,用RNAiso Reagent、柱式试剂盒法、异硫氰酸胍法等3种方法提取苗期叶片总RNA,用PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit反转录获得第一链cDNA,用RNase H、E.coli DNA聚合酶I和E.coli DNA连接酶合成第二链cDNA,用T4 DNA聚合酶进行末端平滑得到双链cDNA,最后,用双低频酶EcoR I和Pst I酶切双链cDNA,用T4 DNA连接酶连接接头,用引物EA00和P00进行预扩增,用引物EA01和P01进行选择性扩增.经1%琼脂糖凝胶和6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果表明,RNA提取及cDNA-AFLP预扩增和选择性扩增的效果良好.