hα-syn蛋白核酸疫苗pVAX1-hαS1-140的构建及其表达

• 作者: 彭国光 江思德 王加才 王少君 王法祥 罗琴
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 帕金森病 人α-突触核蛋白 核酸疫苗
• 年，卷（期）: 2008,（17）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1953-1955
• 页数: 3页
• 分类号: R745.1|R979.5
• 字数: 3143字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2008.17.030

摘要

目的 构建含人α-突触核蛋白(human α-synuclein,hα-syn)编码基因的真核重组载体,并在COS-7细胞中表达,为帕金森病的核酸疫苗开发奠定基础.方法 通过PCR方法扩增hα-syn基因的CDS全长片段,舍酶切位点KpnⅠ、XbaⅠ和Kozak序列.扩增产物和真核表达载体pVAX1经双酶切、纯化、连接,转化感受态细胞E.coli TOP10,筛选含目的基因的重组载体pVAX1-hαS1-140,并在COS-7细胞中表达,用RT-PCR法和western blot法检测其表达产物.结果 经单、双酶切证实插入的基因片段大小一致,基因测序证实其序列和方向完全正确.用RT-PCR法和Westem blot法检测表明,重组质粒pVAx1-hαS1-140在COS-7细胞中能表迭目的蛋白,而且具有生物活性.结论 成功构建了核酸疫苗pVAX1-hαS1-140,并在COS-7细胞中表达,为帕金森病的核酸疫苗治疗研究奠定了良好的基础.