弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统的构建

• 作者: 吴煙 王琼 程璐 郝丽 陈晓光
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 RNA干扰 反向遗传学 载体 速殖子
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 403-407,415
• 页数: 6页
• 分类号: R382.5
• 字数: 4395字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2008.05.001

摘要

目的 构建弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统,为弓形虫基因功能研究提供工具.方法 通过PCR和酶切连接,首先构建弓形虫主要表面抗原1(SAG1)基因启动子驱动的绿色荧光蛋白基因载体pBSK-SAG1/5UTR-eGFP-SAG1/3UTR(pBSK-SAG1/GFP),然后构建以弓形虫热休克蛋白HSP70基因启动子驱动的反向重复序列RNAi载体pBSK-HSP70/5UTR-IntronC-HSP70/3UTR,将载体pBSK-SAG1/GFP中的SAG1/5UTR-eGFP-SAG1/3UTR片段克隆到载体pBSK-HSP70/5UTR-IntronC-HSP70/3UTR中形成载体pBSK-GFP-Hairpin,再将该载体中的GFP-Hairpin片段克隆到载体pHANA-0.5中形成弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统pHANA-hairpin.通过PCR分别扩增SAG1和缓殖子蛋白1(BAG1)基因的正向和反向序列,通过酶切连接.将正向和反向序列克隆到载体pHANA-hairpin中.分别构建靶向SAG1和BAG1基因的RNAi载体pHANA-hairpin/SAG1和pHANA-hairpin/BAG1.结果 酶切鉴定和测序结果表明成功构建载体pHANA-hairpin、pHANA-hairpin/SAG1和pHANA-hairpin/BAG1.结论 弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统成功构建,为下一步基因功能研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈晓光	南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系	92	699	14.0	19.0
2	郝丽	南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系	4	32	3.0	4.0
3	程璐	南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系	14	74	6.0	8.0
4	王琼	南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系	16	113	6.0	10.0
5	吴煙	南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系	3	7	2.0	2.0