牦牛IFN-γ基因的表达及其产物的生物学活性分析

• 作者: 房永祥 景志忠 王生富 窦永喜 贾怀杰 陈国华
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牦牛 IFN-γ基因 表达 生物学活性
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 983-989
• 页数: 7页
• 分类号: S852.42
• 字数: 6695字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.11.013

摘要

用植物血凝素和脂多糖诱导牦牛外周血淋巴细胞,提取细胞总RNA,利用RT-PCR技术克隆了牦牛IFN-γ(YakIFN-γ)基因,然后设计了1对表达引物,从pGEM-YakIFN-γ裁体上扩增YakIFN-γ成熟蛋白基因,将牦牛IFN-γ基因与表达栽体pET-30a连接,构建了重组表达质粒pET-30-YakIFN-γ.用IPTG诱导表达的可溶性表达产物经镍柱亲和纯化,用纯化的重组YakIFN-γ蛋白进行了MTT、抑制肿瘤细胞增殖和细胞病变抑制的生物学特性研究.结果显示,成功克隆和表达了YakIFN-γ基因;序列分析表明:克隆的YakIFN-γ基因序列与GenBank上登录的黄牛IFN-γ基因序列的同源性为99.0%.SDS-PAGE分析和Western-blot检测证实,获得了高纯度的重组YakIFN-γ蛋白.重组YakIFN-γ(rYakIFN-γ)对伪狂犬病病毒的活性单位为2.2×102U/mg.表明表达并纯化的rYakIFN-γ蛋白具有较高的生物学活性和干扰病毒复制的活性.