大鼠IgE依赖组胺释放因子重组蛋白纯化效果的优化

• 作者: 余新炳 徐劲 胡旭初 陈晓湘
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠 IgE依赖组胺释放因子 原核表达载体 蛋白质纯化
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 1203-1205,1209
• 页数: 4页
• 分类号: R392.8
• 字数: 3026字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2008.12.002

摘要

目的 提高大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF)的可溶性表达水平,改善其亲和层析纯化效果,为深入研究该重组蛋白的生物学功能奠定基础.方法 选择多克隆酶切化点BamH I和Xho I,将rHRF完整编码区基因从原有的pET-30a-rHRF重组质粒亚克隆至pET-28a载体,构建重组质粒pET-28a-rHRF;转化大肠杆菌BL21(DE3)后,通过改变IPTG浓度(0.1～1.0 mmol/L),调节诱导表达温度(25～37℃)和时间(1～5 h),筛选能够提高rHRF可溶性表达水平的条件;同时改进亲和层析纯化的条件,提高纯化效果.结果 成功构建重组质粒pET-28a-rHRF,不同IPTG浓度、诱导温度和时间对重组蛋白的可溶件表达水平无明显影响.但是,与pET-30a-rHRF转化菌相比,pET-28a-rHRF转化菌所表达的重组蛋白因其N端和C端均带有6xhis标签,增强了目的 蛋白与树脂的结合力,而使亲和层析纯化效果(重组蛋白的浓度和纯度)显著提高.结论 rHRF重组蛋白的可溶性表达水平不受IPTG浓度、诱导表达温度和时间的影响.但是可溶性重组蛋白两端均携带6xhis标签可使亲和层析纯化效果显著提高,从而有利于获得足昔rHRF 用于进一步的生物学功能研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余新炳	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	201	1352	17.0	28.0
2	徐劲	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	104	568	13.0	17.0
3	胡旭初	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	108	574	13.0	17.0
4	陈晓湘	广州医学院病原生物学教研室	3	7	2.0	2.0