解偶联蛋白-2RNA干扰慢病毒载体的构建

• 作者: 万赤丹 刘涛 王宏博 王帅 王春友 程锐
• 来源期刊: 中国康复
• 学科: 医学
• 关键词: 解偶联蛋白-2 RNA干扰 慢病毒
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 医学康复
• 页码范围: 294-297
• 页数: 4页
• 分类号: R49|R575.5
• 字数: 3065字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/zgkf.2008.05.002

摘要

目的:构建解偶联蛋白-2(UCP-2)基因的RNA干扰慢病毒载体.方法:根据RNA干扰序列设计原则,针对UCP-2mRNA(NM_011671)设计3个RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的DNA双链,酶切后连入慢病毒转移质粒pGCL-GFP中.连接产物转化感受态细胞,所获克隆行PCR鉴定和序列测定.构建成功的RNA干扰质粒与UCP-2表达质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观测转染效果,Western blot检测UCP-2蛋白表达,筛选出干扰效果最好RNA干扰质粒.将该质粒与两种辅助包装原件载体质粒pHelper 1.0(gag/pol元件)载体,Helper 2.0(VSVG元件)共转染293T细胞包装成慢病毒并检测滴度.结果:PCR和测序结果显示针对3个靶点的RNA干扰质粒均构建成功;通过Western blot检测获得最优干扰靶点,并成功包装成滴度为5×108TU/ml的慢病毒.结论:成功构建可供感染的解偶联蛋白-2 RNA干扰慢病毒载体,为后续靶向抑制该基因表达以提高脂肪肝移植成功率的研究莫定物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王春友	华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科	244	1645	18.0	28.0
2	刘涛	华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科	136	733	13.0	20.0
3	万赤丹	华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科	41	180	8.0	11.0
4	王帅	华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科	22	75	3.0	8.0
5	程锐	华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科	10	9	2.0	2.0
6	王宏博	华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科	6	13	2.0	3.0