利用表型筛选法测定整合子对耐药性基因盒的整合频率

• 作者: 吕元 杨泽华 蒋晓飞 陈楠 魏取好
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 整合子 整合酶 耐药性 基因重组
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 细菌耐药
• 页码范围: 729-732
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4049字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5101.2008.08.017

摘要

目的 建立一种利用表型筛选的方法来测定整合子对耐药性基因盒的整合频率. 方法 将整合子和aadA2耐药性基因盒克隆到同一质粒pACYCl84的不同位点,该重组质粒和高表达整合酶的重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),挑选阳性克隆过夜培养后,取适量菌液涂布含有链霉素的LB琼脂平板,同时取适量菌液涂布不含链霉素的LB琼脂平板,过夜培养后计数菌落个数,用以计算整合频率.同时以链霉素平板上的阳性克隆为模板,进行PCR扩增.对扩增产物切胶回收纯化,然后进行测序,以确定aadA2耐药性基因盒整合位点. 结果 在大肠杆菌BL21(DE3)宿主中,整合子对aadA2耐药性基因盒的整合频率为1.1×103,主要的整合位点为attI. 结论 该系统可以用于整合子对基因盒捕获频率的测定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋晓飞	复旦大学附属华山医院检验医学中心	65	553	13.0	21.0
2	吕元	复旦大学附属华山医院检验医学中心	65	447	12.0	18.0
3	陈楠	复旦大学附属华山医院检验医学中心	7	12	2.0	3.0
4	杨泽华	复旦大学附属华山医院检验医学中心	2	5	2.0	2.0
5	魏取好	复旦大学附属华山医院检验医学中心	7	66	3.0	7.0