RT-ARMS-qPCR定量测定线粒体耳聋患者mtDNA A1555G位点突变

• 作者: LIU Qi-cai OU Qi-shui 杨滨 江凌 程祖建 陈勇 陈静
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 听力受损者 DNA,线粒体 点突变
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 临床实验诊断研究
• 页码范围: 793-796
• 页数: 4页
• 分类号: R76
• 字数: 3293字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1009-9158.2008.07.017

摘要

目的 探讨RT-ARMS-qPCR(real time amplification refractory mutation system quantitativePCR)系统定量测定线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)A1555G位点突变在线粒体耳聋发病机制研究中的价值.方法 以PeR扩增含mtDNA 1555位点的片段,并将其克隆到pGEM-T Easy载体上,构建质粒标准品;在引物3'端插入错配碱基AC建立RT-ARMS-qPCR系统,对含突变型和野生型mtDNA 1555位点片段的12例线粒体耳聋患者进行定量检测.结果 RT-ARMS-qPCR系统在检测1个含野生型mtDNA 1555的重组质粒DNA模板时,其批内变异系数(CV)为1.34%,批间CV为1.96%,线性范围为102-108拷贝/ul;突变型或野生型引物只特异扩增相对应的序列,特异性好;突变型/野生型mtDNA拷贝数及突变型所占的百分比与耳聋的严重程度相关(r=0.771,P=0.003),突变型mtDNA所占的比例越高,耳聋程度越严重.结论 RT-ARMS-qPCR系统适合于定量检测mtDNAA1555G点突变的线粒体DNA片段,结果特异、稳定、准确.线粒体耳聋的严重程度与含突变型和野生型mtDNA 1555位点的拷贝数比例有关.