质粒介导RNAi靶向hTERT抑制K562细胞端粒酶活性的研究

• 作者: 方美云 李梅凤 王一
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒载体 RNA干扰 hTERT K562细胞 端粒酶
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 白血病细胞调亡诱导
• 页码范围: 54-60
• 页数: 7页
• 分类号: Q789|R733.7
• 字数: 5271字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2137.2008.01.009

摘要

本研究探讨质粒载体介导的RNAi靶向hTERT对白血病细胞株K562 hTERT基因封闭、端粒酶活性抑制的作用.针对hTERT mRNA化学合成3条siKNA链转染K562细胞,筛选2条高效特异的siRNA链,构建靶向hTERT mRNA的质粒载体pSUPER-U6-Kan r-hTERT-1、pSUPER-126.Kan r-hTERT-2,在脂质体介导下转染K562细胞;48、72小时后分析靶基因hTERT mRNA的表达量,检测细胞端粒酶活性,同时检测细胞凋亡率.结果表明:3条siRNA链中,48小时目的基因表达抑制,但抑制率有差异,72小时后抑制作用渐消失;转染质粒pSUPER-U6-Kan r-hTERT-1(P-1组)、pSUPER-U6-Kan r-hTERT-2(P-2组)的K562细胞hTERT rnRNA表达均下降,P-1组48小时时为0.39±0.13,72小时时为0.57±0.32,P-2组48小时时为0.55±0.20,72小时时为0.88±0.23;端粒酶活性P-1组48小时时为0.42±0.07,72小时时为0.31±0.08;P-2组48小时时为0.49±0.27,72小时时为0.39±0.03;两组均较阴性对照明显下降,且以P-1组作用明显.48小时细胞凋亡率P-1组为18.39±3.08%,P-2组为15.5±3.59%.与阴性对照组7.64±3.73%相比有显著性差异,72小时细胞凋亡率P-1组为13.2±1.18%、P-2组为12.86±3.09%,与阴性对照组8.07±0.19%相比无统计学差异.结论:靶向hTERT的RNAi可抑制目的基因hTERT mRNA表达,进而抑制端粒酶活性.此抑制作用与靶位点选择密切相关,实验中si-hTERT-1优于si-hTERT-2;si-hTERT-3几乎无作用.由质粒载体介导RNAi作用时间明显长于化学合成siRNA,前者72小时甚至更长,后者仅48小时.端粒酶活性被抑制后,48小时的细胞凋亡较对照组有所增加,72小时时与对照组无差别,推测端粒酶活性下调后部分细胞可能被诱导分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方美云	大连医科大学附属第一医院血液科	79	336	10.0	13.0
2	王一	大连医科大学附属第一医院血液科	17	82	6.0	8.0
3	李梅凤		2	10	2.0	2.0