小鼠窖蛋白-1 基因重组腺病毒载体的构建

• 作者: 何永红 刘磊 杨林 汤炜 沈永岱 田卫东 郑晓辉
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 窖蛋白-1 AdEasy腺病毒载体 绿色荧光蛋白 同源重组
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 牙组织工程研究
• 页码范围: 294-297
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 3473字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2008.02.034

摘要

目的 应用AdEasy重组腺病毒载体系统,构建携带小鼠窖蛋白-1(caveolin-1)编码区基因的复制缺陷型重组腺病毒载体 Ad-caveolin-1.方法 将质粒 pTRE2-caveolin-1 中的小鼠caveolin-1编码序列亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV中构建重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-caveolin-1,酶切线性化后转入已含有病毒骨架质粒pAdEasy-1 的大肠杆菌中进行同源重组.筛得的病毒质粒pAd-caveolin-1 经酶切鉴定后,在293细胞中包装成重组腺病毒.荧光显微镜观察绿色荧光表达.扩增并纯化病毒,测定病毒滴度和重组病毒插入片段的序列.结果 重组腺病毒质粒经酶切鉴定证实成功构建了携带 caveolin-1 基因的重组腺病毒载体,转染293细胞后可出现明显的细胞病变效应,并观察到绿色荧光的表达,caveolin-1 基因测序鉴定与 GenBank 中公布序列一致.重组腺病毒的滴度为:2×109pfu/mL.结论 应用 AdEasy 系统成功地构建了重组腺病毒载体 Ad-caveolin-1,通过该系统携带的绿色荧光蛋白(GFP)标记基因可直观检测靶细胞转染和外源基因表达的情况.为进一步研究 caveolin-1 在牙齿发育中的作用莫定了基础.