环介导同温DNA扩增技术快速检测弓形虫DNA的初步研究

• 作者: 何伟 余传信 华万全 李健 梁幼生 殷旭仁 高琪
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫病 诊断 环介导同温DNA扩增
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 585-587
• 页数: 3页
• 分类号: R382.5
• 字数: 2085字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5234.2008.08.009

摘要

目的 建立一种快速的弓形虫活动性感染检测方法. 方法 根据刚地弓形虫特异性基因B1的基因序列设计一套用于环介导同温DNA扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的特异性引物,用DNA聚合酶Bst在65 ℃水浴箱中对含有弓形虫基因组DNA的样本进行LAMP扩增,用荧光染料SYBRⅡ染色及琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色观察结果.同时进行常规PCR对照试验. 结果 琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色发现LAMP扩增产物为大小不等的DNA片段,在扩增产物中加入荧光素SYBRⅡ顔色由紫红色变成绿色荧光,而阴性对照管仍保持紫红色.环介导同温DNA扩增的敏感性为103个弓形虫/ml, 高于常规PCR. 结论 LAMP扩增检测弓形虫DNA的方法已经建立,为发展弓形虫病快速诊断方法奠定了良好的基础.