等电聚焦分离与18O稳定同位素标记联用的磷酸化蛋白质组学定量方法研究

• 作者: 刘金风 卢庄 宋丽娜 王京兰 蔡耘 贾伟 钱小红 隋少卉
• 来源期刊: 分析化学
• 学科: 化学
• 关键词: 18O标记技术 等电聚焦 傅里叶交换离子回旋质谱(LTQ-FTICR-MS) 磷酸化蛋白质组定性与定量
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1017-1023
• 页数: 7页
• 分类号: O6
• 字数: 4390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-3820.2008.08.002

摘要

磷酸化蛋白质组学定量分析,要对磷酸化修饰富集技术和定量技术进行研究.基于此,本研究采用18O稳定同位素标记技术对胰蛋白酶酶解肽段混合物进行标记, 并对其标记时间和标记后胰蛋白酶的变性条件进行优化.结果表明:在pH=4～5的KH2PO4缓冲体系中,37 ℃,标记反应持续19～24 h,除了C-端肽之外,几乎所有的肽段都可达到100%标记;采用TCEP可以有效地抑制16O-18O回标现象.建立了与18O标记技术兼容性良好的IPG-IEF技术对磷酸化肽段进行选择性富集,富集后共从HepG2细胞中鉴定到491个磷酸化位点、362个磷酸化肽段和356个磷酸化蛋白,表明IPG-IEF在大规模磷酸化肽段分离富集中是有效的;最后与高准确度高灵敏度高分辨率的LTQ-FTICR质谱仪联用,建立了基于18O-IPG-IEF-LTQ-FTICR的磷酸化蛋白质组定量技术.实验结果表明,该技术可以实现磷酸化肽段的有效定性和定量.本研究为磷酸化蛋白质组学定量研究提供了实用技术.