鸡输卵管特异表达载体的优化及体内表达

• 作者: 孙怀昌 宋成义 房浩霞 王永娟 高波
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡榆卵管特异表达载体 LacZ基因 体内表达
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 137-141
• 页数: 5页
• 分类号: Q95
• 字数: 4366字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2008.01.022

摘要

为了实现鸡输卵管特异表达载体在相应组织特异高产表达,并简化质粒DNA的制备过程,本研究在已经构建的鸡榆卵管特异表达载体pOV1基础上进行了优化改造,为进一步进行重组药物蛋白的暂态表达及转基因鸡研究奠定基础.首先用限制性内切酶将克隆在pOV1栽体的鸡卵清蛋白基因5'-和3'-调控区切出,同时克隆到切除neo基因及CMV启动子的pcDNA3.0栽体,构建成另一输卵管特异表达载体pOV2;将鸡卵清蛋白基因5'-调控区单独克隆入同样载体,获得第三个鸡输卵管特异表达载体pOV3.为了检验三个输卵管表达载体驱动外源基因在鸡体内输卵管细胞中表达的有效性和特异性.将LacZ报告基因分别克隆入pOV1、pOV2、pOV3中5'-调控区的下游,获得的重组载体pOV1acZ、pOV2LacZ和pOV3LacZ经聚乙烯亚胺包裹后,经翅静脉注射产蛋鸡.用RT-PCR和酶活性检测法对LacZ基因在载体注射鸡体内的表达进行检测,结果显示肝、脾、肾、心等组织中无Lacz基因的表达,而输卵管膨大部不仅有LacZ基因的表达,而且表达的重组酶能分泌到蛋清中,雌激素注射对报告基因的表达具有促进作用,其中pOV3LacZ的表达水平较高.这些试验结果表明,鸡输卵管特异表达载体pOV3具有结构相对简单,表达水平较高、组织特异性较好等优点,能用于鸡输卵管生物反应器的研制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌	扬州大学兽医学院	138	1042	15.0	25.0
2	王永娟	扬州大学兽医学院	15	45	4.0	5.0
3	高波	扬州大学动物科学与技术学院	64	338	9.0	15.0
4	宋成义	扬州大学动物科学与技术学院	80	646	13.0	22.0
5	房浩霞	扬州大学兽医学院	3	21	3.0	3.0