体外鉴定汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的相互作用

• 作者: 周倩云 曾爱忠 李青岭 郭进军 黄爱龙
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 汉坦病毒受体 包膜糖蛋白G2 β3整合素 GST Pull-down
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 136-139
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4084字
• 语种: 中文

摘要

根据汉坦病毒76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81～140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒.通过SDS-PAGE检测G2片段在BL21表达茵中诱导表达及纯化的效果,Western blot检测β 3整合素片段在真核细胞中的表达.将在BL21裂解上清中表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81～140)纯化后与经过GST蛋白预处理的含有β 3整合素片段的细胞裂解上清进行孵育,同时以未做任何转染的HEK293细胞裂解上清和无关蛋白GST-TLM作为阴性对照,通过GST Pull-down验证G2蛋白与β 3整合素之间的相互作用.结果显示在Pull-down所获蛋白复合物中检测到β3整合素27～133位氨基酸片段产物的存在.结果表明G2蛋白与β3整合素之间可能存在有直接的相互作用,为β 3整合素作为汉坦病毒细胞膜受体提供了进一步证据.