高纯度质粒DNA规模化生产流程的建立和改进

• 作者: 刘耘 曹以诚 李刚刚
• 来源期刊: 现代食品科技
• 关键词: 高纯度质粒DNA 规模化生产流程 提取 纯化 层析技术
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 工艺技术
• 页码范围: 433-438
• 页数: 6页
• 分类号: Q523
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-9078.2008.05.009

摘要

通过对质粒提取过程进行分析,探讨质粒提取过程中的影响因素,分析影响质粒质量的因素,以及优化提取工艺流程,并建立质控标准来控制质粒提取过程中带来质量和数量损失,从而制备出高纯度的质粒DNA.温度诱导可以增加质粒DNA的产量,在大肠杆菌对数生长中期进行温度诱导,从37～43 ℃,每间隔1 ℃度进行诱导,结果表明经42 ℃诱导12 h,质粒DNA的产量可以增加66%以上,为降低成本,大规模生产重组质粒提供良好保障.另外对碱裂解粗提质粒的方法和流程进行改进,采取LiCl去除细胞碎片和杂蛋白;PEG8000沉淀质粒DNA从而去除经RNAase消化的RNA;之后利用少量的酚氯仿混合液去除蛋白质;不仅蛋白质,RNA去除干净,而且在实验时间安排上以及试剂使用量上进行控制,达到了贵重试剂使用量少,去除杂质干净的效果,更为后续的精提做好准备.利用凝胶层析,亲和层析,阴离子交换层析依次去除残余在质粒DNA中的蛋白质、RNA、非超螺旋DNA以及内毒素,达到了制备高纯度质粒DNA要求,并且达到了可以在动物实验中进行转染的质量要求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘耘	华南理工大学生物科学与工程学院	31	411	12.0	19.0
2	曹以诚	华南理工大学生物科学与工程学院	48	156	7.0	10.0
3	李刚刚	华南理工大学生物科学与工程学院	1	2	1.0	1.0