兔肌源性干细胞的生物学特性及表型分析

• 作者: 何涛 冀晨阳 张金明 梁伟强 黄红军
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 肌源性干细胞 Preplate技术 生物学特性 表型
• 年，卷（期）: 2008,（43）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8512-8516
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 1016字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.43.030

摘要

背景:骨髓间质干细胞作为种子细胞具有巨大的分化潜力和优势,但对于再牛障碍性贫血或骨髓源性肿瘤等疾病的应用受限.现已发现肌源性干细胞具备与其相似的优越性,已引起相关领域研究者的注意.目的:观察兔肌源性干细胞的生物学特性,并对其进行表犁分析.设计、时间和地点:细胞体外观察,于2005-08/2006-03在中山大学附属第二医院医研中心完成.材料:清洁级1.5月龄新西兰大向兔1只,增殖培养基为DMEM-LG+体积分数0.1胎牛血清+100 g/L马血清,融合培养基为DMEM-LG+2%胎牛血清.方法:兔麻醉后取大腿肌肉,采用差速贴壁Preplate技术分离培养肌源性干细胞,以Ⅺ胶原酶、disperse蛋白酶及胰蛋白酶分步消化,沉淀用增殖培养基重悬,接种在胶原包被的培养瓶中,该培养瓶为PP1.PP1于37℃、含体积分数为0.05的CO2培养箱中静置过夜,随后将悬液转移到另一个胶原包被的培养瓶,此为PP2.随后同法建立PP3,PP4,PP5,PP6.将PP6接种到6孔板进行融合实验,分为两组:一组使用增殖培养基培养,在汇合度超过50%后继续培养,不传代:另一组使用融合培养基进行培养,汇合度达30%时传代培养.主要观察指标:收集PP1-PP6,采用流式细胞仪、免疫细胞化学及Western Blot法鉴定细胞表型.通过不同汇合度及不同浓度血清培养,检测PP6融合情况.结果:PP6细胞＞80%为desmin+,＞70%为Bcl-2+,＞95%为CD45,提示为高浓度肌源性干细胞,随着纯化步骤的进行,α-SMA表达逐渐减弱,至高度纯化的PP6时已无α-SMA表达.PP6在高汇合度(＞50%)或低血清(仅含2%血清)培养时,极易融合成肌管或肌细胞链,骨骼肌肌球蛋白呈阳性表达.结论:肌源性干细胞具有高水平表达desmin,Bcl-2,极低水平表达CD45,不表达α-SMA的生物学特性,在高汇合度或低血清培养条件下能够多向分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁伟强	中山大学附属第二医院整形外科	56	205	8.0	11.0
2	张金明	中山大学附属第二医院整形外科	78	301	9.0	13.0
3	冀晨阳	中山大学附属第二医院整形外科	37	143	8.0	10.0
4	何涛	中山大学附属第二医院整形外科	7	36	3.0	6.0
5	黄红军	中山大学附属第二医院整形外科	4	32	3.0	4.0