过氧化物酶增殖子活化受体-γ siRNA腺病毒载体的构建

• 作者: 刘宏建 张弛 李振伟 李月白 殷力 王义生 王少华 赵国强
• 来源期刊: 郑州大学学报(医学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 过氧化物酶体增殖子活化受体-γ 腺病毒载体 克隆
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 477-479
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2293字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2008.03.022

摘要

目的:构建针对过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因的siRNA腺病毒载体.方法:依据siRNA设计原则,在PPARγ mRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(36-54、73-91),体外合成对应发卡样DNAs,退火后先将其克隆入pSIREN-Shuttle载体,再亚克隆入pAdeno腺病毒载体,对插入序列进行DNA序列分析.结果:发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸退火后,电泳可见明亮靶条带.连接退火寡核苷酸和pSIREN-Shuttle载体得到阳性克隆pSIREN-Shuttle-siPPARγ-36、pSIREN-Shuttle-siPPARγ-73.同源重组后得到亚克隆pAdeno-siPPARγ-36、pAdeno-siPPARγ-73,测序证实插入序列与设计序列完全一致.结论:成功构建2个靶向PPARγ基因的siRNA载体pAdeno-siPPARγ-36和pAdeno-siPPARγ-73.