SOX-9真核表达质粒转染兔骨髓基质细胞的可行性

• 作者: 卢小虎 徐忠世 李冉 林博文 肖德明
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓基质细胞 SOX-9 转染 软骨
• 年，卷（期）: 2008,（47）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9384-9388
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 1052字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.47.014

摘要

背景:SOX-9在软骨组织的发生和发育中具有重要作用,可促进间充质细胞凝集,具有转录激活结构域,能直接调控转录.目的:选用SOX-9基因构建pDC316-SOX-9质粒转染兔骨髓基质细胞,观察SOX-9基因对骨髓基质细胞生长特性及产物表达的影响.设计、时间及地点:细胞基因工程体外实验,于2006-06/2007-01在中国科学院北京基因组研究所完成.材料:SPF级6周龄新西兰大白兔8只,用于分离培养骨髓摹质细胞.方法:采用脂质体介导法将构建的pDC316-SOX-9质粒转染兔骨髓基质细胞,细胞转染分为SOX-9质粒转染组、空质粒组、只加入等量脂质体的空白对照组.主要观察指标:通过细胞形态、细胞生长活性、免疫组织化学及HE染色、RT-PCR法、EUSA法检测SOX-9基因转染骨髓基质细胞是否成功.结果:pDC316-SOX-9质粒转染4 d出现小片的细胞集落,挑取克隆扩增培养后,细胞呈梭形纤维状.随转染时间的延长.空白对照组细胞逐渐死亡,SOX-9质粒转染组、空质粒组的细胞活性均显著延长,在转染2周达高峰,之后逐渐降低.转染第6天,SOX-9质粒转染组骨髓基质细胞免疫组织化学染色呈棕黄色,稳定表达SOX-9蛋白,HE染色可见多个双核细胞,细胞增殖旺盛,与成软骨细胞类似:空质粒组无SOX-9蛋白表达,组胞增殖分裂不旺盛.SOX-9质粒转染组表达SOX-9 mRNA,宅质粒组及空白对照组均无SOX-9mRNA表达.转染后24,48,72h及1,2周,SOX-9质粒转染组细胞上清液中SOX-9含量均明显高于空质粒组、空白对照组(P＜0.01).结论:利用pDC316-SOX-9质粒成功转染兔骨髓基质细胞,增强细胞生长活性,并能持续稳定的分泌SOX-9蛋白,可诱导骨筒基质细胞向软骨方向分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖德明	深圳市第二人民医院骨科	37	176	8.0	10.0