山羊痘病毒P32基因的克隆、测序及在原核细胞表达

• 作者: 周碧君 岳筠 徐春志 文明 李永明 程振涛 许乐仁
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊痘病毒 P32基因 基因克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 57-60
• 页数: 4页
• 分类号: S852.654
• 字数: 3663字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-1302.2008.04.019

摘要

为比较山羊痘病毒贵州分离株P32基因与国内外分离株的关系,并获得P32蛋白,应用PCR方法从贵州山羊痘病毒分离株的核酸样本中扩增出P32基因片段,将PCR产物克隆至pMDl8-T载体,对重组质粒进行了基因序列测定.将测定的P32基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中相应序列作比较,同源性分别达到99.4%和98.4%,表明山羊痘病毒的P32基因具有高度保守性.将P32基因克隆至原核表达载体pET-28a,成功构建重组表达质粒pET-28a-P32/LD,转化至大肠杆菌BL2l(DE3)进行诱导表达.SDS-PAGE检测显示,重组细菌在35.5 kDa处表达一条特异性的蛋白带,而阴性对照未见这条蛋白带;Western-Blotting检测证实,这条蛋白带能与山羊痘高免血清反应而显示其免疫学活性.