幽门螺杆菌毒素蛋白Tipα对人胃黏膜上皮细胞株GES-1的影响

• 作者: 于莲珍 张国新 张红杰 施瑞华 程平 郝波
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 螺杆菌,幽门 基因 上皮细胞 细胞因子类 胃肿瘤
• 年，卷（期）: 2008,（22）
• 所属期刊栏目: 幽门螺杆菌
• 页码范围: 1528-1532
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0376-2491.2008.22.005

摘要

目的 研究幽门螺杆菌(Hp)分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导相关蛋白(Tipα)对人胃黏膜上皮细胞株GES-1的影响.方法 从Hp 26695菌株获取位于Hp 0596的Tipα基因,并将其开放读码框序列克隆入真核表达载体pcDNA3.1.将重组质粒pcDNA3.1-Tipα和空质粒脂质体转染人胃黏膜上皮细胞GES-1,用G418筛选阳性克隆.同时用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹的方法检测Tipα基因的表达.以空质粒转染的GES-1细胞和正常的GES-1细胞作为对照组.采用MTY,流式细胞术,ELISA和Western印迹的方法分别检测细胞的增殖、细胞周期、致炎因子肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1β,IL-8的变化,Bcl-2和P53基因的表达.结果 成功构建了Tipα基因重组真核表达质粒.Tipα基因和空载体分别转染GES-1细胞,通过G418筛选出了稳定转染株.MTY检测结果显示与对照组相比,转染重组质粒pcDNA3.1-Tipα的GES-1 (GpcDNA3.1-Tipα)生长曲线上升,提示GpcDNA3.1-Tipα细胞比转染空质粒组(GpcDNA3.1)和正常对照组(GES-1)增值更快.流式细胞术细胞周期分析显示GpcDNA3.1-Tipα细胞进入S期的比例多于GES-1细胞组和GpcDNA3.1细胞组[(45.33±1.03)%vs(38.24±1.25)%、(33.94±1.67)%],G1期比例低[(41.39±0.08)%vs(49.74±0.12)%、(49.27±0.15)%],细胞凋亡率明显低(0.76±0.04 vs 16.84±2.16、8.36±1.07).ELISA结果显示:GpcDNA3.1-Tipα,GpcDNA3.1和GES-13组细胞胞内TNF-α的浓度,各组之间差异无统计学意义(P＞0.05),而胞外TNF-α浓度,GpcDNA3.1-Tipα组高于两个对照组(均P＜0.05);GpcDNA3.1-Tipα胞内和胞外IL-1β、IL-8的浓度均高于两个对照组(P＜0.05).Western印迹结果与两个对照组比较,GpcDNA3.1-Tipα细胞Bcl-2表达增加,而P53基因表达则受到抑制.结论 GpcDNA3.1-Tipα细胞能稳定高表达Tipα蛋白,诱导致炎细胞因子TNF-β,IL-1β,IL-8的高表达,促进细胞的增殖,减少细胞凋亡,可能通过上调Bcl-2基因,下调P53基因.Tipα作为一种新的Hp毒素蛋白在Hp致胃癌发生中可能发挥重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施瑞华	南京医科大学第一附属医院消化科	174	1190	17.0	24.0
2	张红杰	南京医科大学第一附属医院消化科	122	1671	21.0	34.0
3	于莲珍	南京医科大学第一附属医院消化科	33	219	9.0	13.0
4	郝波	南京医科大学第一附属医院消化科	64	379	10.0	15.0
5	张国新	南京医科大学第一附属医院消化科	125	705	14.0	19.0
6	程平	南京医科大学第一附属医院消化科	1	6	1.0	1.0