利用SMART技术构建羊驼皮肤全长cDNA文库

• 作者: 张俊珍 李鹏飞 白瑞 程志学 范瑞文 董常生 赫晓燕
• 来源期刊: 畜牧兽医杂志
• 关键词: 全长cDNA文库 SMART技术 羊驼皮肤
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 8-11
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-6704.2008.06.003

摘要

为了快速、经济和有效地寻找新基因,利用大规模测序及分析技术构建羊驼皮肤组织的基因表达谱,实验构建了羊驼皮肤cDNA文库.Trizol提取皮肤总RNA后,用SMART法构建文库:经反转录反应合成第一链cDNA,用LD PCR法将第一链产物再合成第二链和双链cDNA;经蛋白酶K和Sfi消化后,用CHROMA APIN-400分离双链cDNA;将合适大小的ds cDNA通过16℃过夜孵育使其转入到载体中,将重组产物在22℃下用λ-phage孵育2h进行包装,制成文库.该cDNA文库的特征为:包装效率为106(pfu/mL),重组率在80%以上.该cDNA文库质量可达到进行后续研究的要求.