PSA启动子介导的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白在前列腺癌细胞中的特异表达及活性初探

• 作者: 任凯 吉恺 孔峰 张建业 王小玲 胡晓燕 苑辉卿 蔡捷
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺特异抗原 TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白 前列腺肿瘤 LNCaP细胞 HT-29细胞
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 498-503
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 3847字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.03.019

摘要

目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前列腺癌的抑制作用.方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p21读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p21,并进行酶切、测序鉴定.脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录PCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况.MTT法检测转染pPSA-TAT-p21后LNCaP细胞的增殖情况.结果:成功构建pPSA-TAT-p21真核表达载体.RT-PCR和Western blotting结果显示PSA-TAT-p21在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p21(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达.细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p21蛋白.结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据.