变性温度和时间对实时定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒的影响

• 作者: 刘宝林 华泽钊 程远霞 陈颖 魏燕
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 实时定量聚合酶链反应 乙型肝炎病毒 变性温度 变性时间
• 年，卷（期）: 2008,（44）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8677-8680
• 页数: 4页
• 分类号: R512
• 字数: 3448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.44.027

摘要

背景:在实时荧光定量聚合酶链反应检测过程中,由于设计的热循环参数小同,检测结果常会出现假阳性或假阴性.目的:变件温度、变性时间以及聚合酶链反应运行的温度特性对实时荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-07-06/08在上海市安图医院PCR实验室完成.材料:LightCycler荧光聚合酶链反应检测仪山美国罗氏公司提供,乙型肝炎病毒核酸扩增聚合酶连反应荧光定量检测试剂盒由深圳匹基公可提供.方法:聚合酶链反应运行程序条什变性温度分别为88～97℃,变件时间分别为5 s和40 s,退火和延伸60℃,40 s,循环数40.主要观察指标:乙肝病毒遗传物质的数量.结果:聚合酶链反应运行温度上冲和下冲比较严重变性时间对DNA浓度较低的样本影响很大,DNA很难被检测出;变性温度超过95℃,变性时间超过40 s时,检测到的DNA的量明显降低;变性时间小于 20 s时,容易出现假阴性.结论:变性时间太短、变性温度太高且变性时间太长容易造成乙型肝炎病毒检测出假阴性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	华泽钊		229	2478	25.0	35.0
2	刘宝林		337	1862	19.0	27.0
3	程远霞		8	43	2.0	6.0
4	魏燕		18	72	5.0	8.0
5	陈颖		7	67	4.0	7.0